Bakteriální expresní systémy

1) EXPRESNÍ SYSTÉMY PRO BAKTERIE E. COLI

Expresní systém pET

Expresní systém pET je nabízen s N- nebo C-koncovými vektory s označením 6xHN spolu s purifikací na bázi IMAC. Dvě úrovně regulace zajišťují nejvyšší úroveň exprese proteinů. První úroveň zajišťuje řada vektorů pET6xHN, druhá úroveň je zajištěna v hostitelských buňkách.

Hlavní vlastnosti:

• Vyšší úroveň indukovatelné exprese proteinu a přísnější kontrola cílového genu.
• Systém založený na E. coli BL21(DE3).
• Možnost volby mezi N- a C-koncovými vektory s označením 6xHN.
• Možnost volby rychlého a jednoduchého klonování pomocí In-Fusion PCR nebo tradičního klonování pomocí ligázy T4 DNA.
• Purifikace exprimovaného proteinu pomocí niklové pryskyřice His60 nebo kobaltové pryskyřice TALON

Systém pro výroby jednoho proteinu (SPP System II, III & IV)

Tato modifikovaná verze expresních vektorů s chladovým šokem spolu s expresí endoribonukleázy MazF zajišťuje čistotu proteinu a stabilní izotopové značení proteinu. Produkce cílového proteinu začíná 72 hodin po indukci.

Hlavní vlastnosti:

• Vhodné pro radioizotopové značení.
• Až 90 % nově exprimovaného buněčného proteinu je značený cílový protein
• Vhodné pro NMR analýzu
• Exprese purifikovaného proteinu

Expresní systém HAT-tag

Tento systém využívá HAT (histidinovou afinitní značku) při expresi proteinů a konkrétně při purifikaci proteinů. Nová polyhistidinová epitopová značka zakódovaná ve vektoru HAT umožňuje purifikaci proteinu v neutrální nebo fyziologické hladině pH nebo v nativních podmínkách.

Hlavní vlastnosti:

• Purifikace proteinů při neutrálním pH
• Použití za nativních nebo denaturačních podmínek
• Vyšší rozpustnost proteinů
• Optimální purifikace pomocí pryskyřice TALON IMAC

2) EXPRESNÍ SYSTÉMY BREVIBACILLUS

Brevibacillus Expression System

Systém je vhodný pro expresi eukaryotických rekombinantních proteinů s vysokým výtěžkem aktivního proteinu. Produkty zůstávají neporušené díky tomu, že systém neobsahuje proteázy. K dispozici jsou také vektory s His-tagem (pNC-HisE, pNC-HisF, pNC-HisT, pNI-His) pro rychlé a snadné čištění exprimovaných cílových proteinů.

Hlavní vlastnosti:

• Produkce vylučovaných nebo intracelulárních rekombinantních cílových proteinů
• Produkty zůstávají v kultivačním médiu neporušené
• Na rozdíl od E. coli neprodukuje žádné endotoxiny
• Proteiny jsou produkovány v aktivní formě
• Snadná kultivace, manipulace a sterilizace

3) EXPRESNÍ SYSTÉMY B. SUBTILIS

B. Subtilis Secretory Protein Expression System

Bacillus subtilis má schopnost vylučovat bílkoviny přímo do kultivačního média, je vhodný pro střednědobou a rozsáhlou fermentaci a nemá kodonovou odchylku. Systém pro expresi sekrečních proteinů od společnosti Takara Bio umožňuje rychlé vytvoření knihovny klonů B. subtilis, přičemž každý klon nese konstrukt pBE-S , ve kterém je ORF vašeho proteinu zájmu spojen se 173 různými sekvencemi pro jedinečné signální peptidy.

Hlavní vlastnosti:

• B. subtilis, který obsahuje pBE-S DNA, „shuttle vector“ E. coli/B. subtilis obsahující:
  • B. subtilis-derived subtilisin (aprE) promotor
  • sekreční signální peptid (aprE SP)
  • vícenásobné klonovací místo (MCS)
  • 3' (C-terminální) sekvenci His-tag
• Dodává se se směsí DNA SP, knihovnou sekvencí DNA kódujících 173 jedinečných sekrečních signálních peptidů.
• Plně kompatibilní s klonovacími soupravami a systémy In-Fusion, což umožňuje rychlé a snadné vytváření konstrukcí.
• Obsahuje kmen B. subtilis RIK1285