Interakce proteinů s proteiny

Všechny základní procesy v buňce jsou regulovány složitou sítí interakcí protein-protein. iDimerize technologie umožňuje indukovat ot interakci mezi dvěma proteiny nebo relokalizaci proteinu, a tím řídit jakýkoli buněčný proces, který je těmito událostmi aktivován (nebo inaktivován).

1) iDimerize™ Inducible Homodimer System

Umožňuje pozorování interakce protein-protein pod kontrolou v reálném čase. Protein, který vás zajímá, je fúzován s vazebnou doménou DmrB a dimerizace je indukována přidáním homodimerizátoru B/B.

Hlavní vlastnosti:

• Systém přináší interakce protein-protein pod kontrolou malých molekul v reálném čase.
• Rychlá chemická indukce buněčných signálních drah
• Aktivace jakékoli dráhy nebo buněčné události řízené homoligomery (např. dimery, trimery nebo tetramery).

2) iDimerize™ Inducible Heterodimer System

Zajišťuje vytváření a kontrolu specifických interakcí mezi dvěma různými proteiny. Zájmové proteiny jsou fúzovány s vazebnými doménami DmrA, respektive DmrC, a dimerizace je indukována přidáním ligandu A/C Heterodimerizer prostupujícího buňkami do kultivačního média.

Hlavní vlastnosti:

• Systém lze použít k vytvoření a kontrole specifických interakcí mezi dvěma různými proteiny.
• Dosáhnout řízení buněčných dějů, které jsou obvykle aktivovány heterodimerizací proteinů, pomocí malých molekul.
• Řídit lokalizaci cílového proteinu

3) iDimerize™ Regulated Transcription System

Transkripční faktory jsou bifunkční proteiny, které rozpoznávají specifické sekvence DNA v blízkosti cílových genů (prostřednictvím vazebné domény DNA) a poté rekrutují transkripční mechanismus buňky k aktivaci transkripce.

Hlavní vlastnosti:

• Přísně regulovaná transkripce pomocí technologie iDimerize
• Řízení transkripce v závislosti na dávce a na malých molekulách.
• Aktivační doména je před přidáním dimerizačního ligandu fyzicky oddělena od DNA, což vede k nízkému pozadí.

4) iDimerize™ Reverse Dimerization System (indukovatelná sekrece)

Zájmový protein je fúzován s vazebnou doménou DmrD. Molekuly fúzního proteinu agregují, pokud není přítomen ligand D/D Solubilizer.

Hlavní vlastnosti:

• Přináší rozrušení proteinových komplexů pod kontrolou malých molekul v reálném čase.
• Indukovatelná sekrece proteinů
• Indukovatelná disociace/disagregace proteinů

5) Ligandy pro chemicky indukovanou dimerizaci (CID)

Sbírka ligandů potřebných pro všechny pracovní postupy technologie iDimerize.

Hlavní vlastnosti:

• B/B Homodimerizer (AP20187) je syntetický ligand propustný pro buňky.
• Ligand lze použít k indukci homodimerizace fúzních proteinů obsahujících doménu DmrB.
• Malé molekuly používané pro chemicky indukovanou dimerizaci

6) Protilátky iDimerize

Po spojení vašeho proteinu zájmu s jednou z dimerizačních značek dodávaných se systémy iDimerize Homodimer (DmrB) nebo iDimerize Heterodimer (DmrA a DmrC) můžete chtít monitorovat expresi proteinu pomocí SDS-PAGE a následného Western blotu.

Hlavní vlastnosti:

• Detekce domén DmrB používaných pro iDimerize Homodimer Systems.
• Detekce domén DmrA a DmrC používaných pro heterodimerní systémy iDimerize

7) Použití iDimerize pro indukovanou dimerizaci proteinů in vivo

Homodimerizátor B/B (AP20187) byl nejčastěji používán in vivo a obvykle vyšetřovatelé používali dávky 0,5-10 mg na kg pro každou injekci. Při tomto dávkování stačí 5 mg dimerizátoru na 20-400 injekcí pro 25gramovou myš.

Hlavní vlastnosti:

• Homodimerizátor B/B (AP20187) byl nejčastěji používán in vivo a vyšetřovatelé obvykle používali dávky 0,5-10 mg na kg pro každou injekci.
• Malé molekuly používané pro chemicky indukovanou dimerizaci (CID)
• Větší velikosti 5 mg a 25 mg pro použití in vivo